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微生物法測定泛酸的方法步驟

更新時間:2018-05-18  |  點擊率:2563

泛酸是輔酶ACoA)和酰基載體蛋白(ACP)生物合成的重要前體物質(zhì),參與人體中類固醇、褪黑激素、抗體和亞鐵血紅素的合成,是維持生命正常生理機能的必需小分子有機物,也是嬰幼兒乳粉中重要的營養(yǎng)物質(zhì)。

 

目前的兩種方法——微生物法和液相色譜法都可以用于檢測奶粉等嬰幼兒食品中的泛酸,結(jié)果具有可比性。微生物法法測定泛酸含量靈敏度高,其標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)、回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差方面,檢測結(jié)果都較好。而液相色譜法檢測速度較慢、成本較高,所以采用微生物法進行大量樣本的測定,被美國AOAC所推薦,也是我國國家標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法的仲裁法。

 

該方法操作步驟較多,微生物生長的不確定性強也會影響結(jié)果。注意這些可能存在的影響因素,可以保證測量結(jié)果的穩(wěn)定和準(zhǔn)確。有人研究發(fā)現(xiàn),泛酸檢驗結(jié)果影響zui大的是試樣前處理(存在泛酸損失)及稀釋(包括容量瓶、吸量管、量筒等玻璃器具的校準(zhǔn)和室溫對液體體積的影響,其次是標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。另一項研究則發(fā)現(xiàn),是微生物因素引起的吸光度曲線偏離線性影響zui大,因此建議在日常監(jiān)測中,減少微生物培養(yǎng)環(huán)境因素的波動,對培養(yǎng)環(huán)境實時更嚴(yán)格的控制。

 

關(guān)于微生物法測泛酸的精密度,有人對14個嬰兒配方奶粉的泛酸含量進行了測定,進行了28次相對誤差和20次回收率的觀察,發(fā)現(xiàn)75%的結(jié)果相對誤差都<10%,回收率有80%在90~110%之間,說明該方法用于檢測奶基嬰幼兒食品是可行的。

又有研究發(fā)現(xiàn),標(biāo)準(zhǔn)曲線在0~50ng/ml范圍內(nèi),線性關(guān)系較好。同時提出幾點注意事項,要注意無菌操作;避免菌種污染;玻璃器皿要嚴(yán)格清洗;必要的話,樣本多做幾個稀釋度的實驗;降溫過程中,要將試管浸入冷水中,使其迅速降溫,避免沉淀和顏色產(chǎn)生;用軟件擬合4次泛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線。

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