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免疫細胞分離技術

更新時間:2022-01-10  |  點擊率:793

1、淋巴細胞的分離

取肝素抗凝血1m1 加Hanks 液1m1 稀釋后,沿管壁徐徐滴流疊加盛有2m1 淋巴細胞分離液的試管內(nèi)(注意勿與分離液混合,然后2000r/min 水平離心20min,管內(nèi)分為4 層,自上而下依次為血漿,單個核細胞,顆粒白細胞、紅細胞。

用毛細管伸至單個核細胞層中(位于細胞分離液與血漿的界面上),沿管壁輕輕吸出全部細胞。然后用Hanks 液洗兩次,每次2000r/min 離心10min,最后用RPMI l640 培養(yǎng)液將細胞配成2×10 6 /m1 的細胞懸液備用。

2、T 細胞及B 細胞的分離

將淋巴細胞懸液通過尼龍棉柱,B 細胞粘附于尼龍棉上,T細胞則不粘附,先用RPMI l640 培基洗脫尼龍棉柱,流下的細胞懸液含有豐富的T 細胞。然后用力反復擠壓尼龍柱、擠出粘附在尼龍 棉上的B 細胞,并用少量的RPMI l640 培基洗脫,此細胞懸液含有豐富的B 細胞。尼龍柱(塑料管)的長短和尼龍棉的多少,視分離細胞的多少而定。

3、CD4 細胞及CD8 細胞的分離

(1)CD4 細胞的分離:將一定量的T 細胞懸液通過一根SephDdexC—10 柱,然后用少量的RPMll640 培養(yǎng)洗滌,收獲的細胞懸液約含85%的CD4 細胞。

(2)CD8 細胞分離:用Tris 緩沖液稀釋羊抗鼠IgG(濃度為10μg/m1)包被一平皿表面,然后放置4℃過夜,沒有包被上的抗體用PBS 洗凈。

然后將已標記有抗CD8 單克隆抗體的T 細胞(細胞濃度為1×l0 7 /m1)3m1 加入上述的平皿內(nèi),4℃放置2 小時,用PBS 輕輕洗凈末粘附的細胞,然后用毛細管加入10m1 PBS 吹打。收集的脫落細胞經(jīng)洗滌后懸浮在RPMI l640 培基中備用。CD4 細胞亦可用此法分離。

4、單核巨噬細胞的分離

單核巨噬細胞有粘附塑料或玻璃表面的特性,而淋巴細胞則無此特性,借此可將這兩類細胞分開,其方法簡述如下。

將待分離的細胞懸液(如實物動物的腹腔液)加入適當大小的塑料或玻璃平皿內(nèi),置于37℃ C02 溫箱內(nèi)溫育1 小時,然后用RPMI 1640 培基輕輕漂洗平皿表面,去除非粘附細胞,再將粘附有細胞的平皿表面用上述培基輕輕洗刷,收集粘附的單核巨噬細胞。如果要獲得純度較高的單核巨噬細胞,可重復上述過程。


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