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培養(yǎng)細胞最頭疼的就是被支原體污染了......

更新時間:2022-01-13  |  點擊率:700

在細胞培養(yǎng)過程中,支原體感染發(fā)生率達到63%,因而細胞培養(yǎng)過程中被支原體污染是一個世界性的難題。細胞培養(yǎng)中常遇見的有細菌污染、真菌污染、支原體污染、病毒污染等。說起支原體污染,估計細胞培養(yǎng)的同學(xué)就開始犯愁了,細胞培養(yǎng)的老手都知道,支原體污染非常不易察覺。有的實驗室被支原體污染后,如果不進行有效*的支原體清除,該實驗的細胞培養(yǎng)很難進行下去,細胞傳代3代以后狀態(tài)就急劇下滑,無法進行正常實驗,有的實驗室甚至只能指望換細胞間。那么怎樣才能有效檢測并清除支原體污染呢?

支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染(一些支原體在人體是正常菌群)、培養(yǎng)的污染、污染支原體的細胞造成的交叉污染、實驗器材帶來的污染和用來制備細胞的原始組織或器官的污染。細胞培養(yǎng)工作中,主要從以下幾個方面來預(yù)防支原體的污染:控制環(huán)境污染;嚴格實驗操作;細胞培養(yǎng)和器材要保證無菌;在細胞培養(yǎng)中加入適量的抗生素。

如果受到支原體污染時,細胞形態(tài)較之無明顯變化,極易被忽視,往往直到污染非常嚴重時才能發(fā)現(xiàn)。受污染的細胞膜上可能有幾百個支原體,這些支原體競爭營養(yǎng)并釋放有毒的代謝產(chǎn)物,嚴重影響實驗結(jié)果。

對于費力擴增的細胞(如已轉(zhuǎn)染,或經(jīng)過體外刺激),如果細胞中發(fā)現(xiàn)有支原體污染,但此細胞又不愿丟棄,希望繼續(xù)培養(yǎng),推薦使用MB公司生產(chǎn)的專li復(fù)合抗生素Zell Shield®。

注意:

①每次使用Zell Shield®之前,務(wù)必先用廠家推薦的“懸浮沖洗法"處理細胞,這樣才能達到最佳的支原體祛除效果。

②在祛除細胞支原體污染的過程中,需要環(huán)境、試劑及耗材確保潔凈,無新的支原體污染加入。只要如法操作,在使用Zell Shield®四代后,細胞中的支原體即可祛除。

特點

1) 高效廣譜。Zell Shield®通過阻止支原體、真菌、霉菌、致命病菌增殖過程中DNA及蛋白的合成,有效抑制上述微生物的增殖。

2) 安全。無細胞毒性,專li復(fù)合支原體敏感抗生素,對大多數(shù)細胞株無毒。

3) 活性穩(wěn)定。在細胞培養(yǎng)期間,Zell Shield®始終保持穩(wěn)定的活性。

4) 使用方便。Zell Shield®為無菌溶液,可直接加入培養(yǎng)基使用。

用法

1) 在每次使用Zell Shield®之前,細胞傳代時,先使用廠家推薦的“懸浮沖洗法"處理好細胞,再使用加了Zell Shield®的培養(yǎng)基養(yǎng)細胞,能達到最佳的祛除支原體的效果。(“懸浮沖洗法"的詳細步驟,見下一頁)

2) Zell Shield®常規(guī)為-18℃保存,建議使用前,先融化分裝,仍舊-18℃避光保存,使用時按需融化配置。避免反復(fù)凍融。

3) Zell Shield®按1:100濃度可直接加入培養(yǎng)基。例如:500ml培養(yǎng)基中添加5ml Zell Shield®,50mL/瓶的Zell Shield®可供5L培養(yǎng)基使用。



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