什么是細胞傳代？

細胞傳代培養(yǎng)（subculture），當原代培養(yǎng)成功以后，隨著培養(yǎng)時間的延長和細胞不斷分裂，一則細胞之間相互接觸而發(fā)生接觸性抑制，生長速度減慢甚至停止；另一方面也會因營養(yǎng)物不足和代謝物積累而不利于生長或發(fā)生中毒。

將培養(yǎng)物分割成小的部分，重新接種到另外的培養(yǎng)器皿（瓶）內，再進行培養(yǎng)的過程被稱之為細胞傳代培養(yǎng)。對單層培養(yǎng)而言，80%匯合或剛匯合的細胞是較理想的傳代階段。

耗材準備

在實驗開始前，需要把實驗用品準備齊全。

酒精、預熱好的*培養(yǎng)基、PBS緩沖液、胰酶、培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿、移液器、移液管、離心管等

實驗用的超凈工作臺需提前半小時照射紫外線。

實驗操作

以貼壁細胞培養(yǎng)為例

1、穿好細胞房專用的實驗服，戴好滅菌手套和口罩。

2、從培養(yǎng)箱中取出細胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿（Tip1：一般選擇處于對數(shù)期的細胞），用75%酒精消毒外包裝后轉移至到超凈臺中。

3、打開蓋子（Tip2：如果是培養(yǎng)皿，只需打開一個縫隙即可，避免污染），輕輕吸出舊的培養(yǎng)液，加入適量PBS緩沖液洗滌1-2次（Tip3：注意從未培養(yǎng)細胞的側壁加入，以免沖掉細胞），棄去PBS緩沖液。

4、用移液器加入適量胰酶（Tip4：具體量根據(jù)實驗需要確定，提前將胰酶37℃預熱，效果更好），蓋好蓋子，“十字"晃動，使胰酶充分接觸細胞。

5、將加入胰酶的細胞培養(yǎng)瓶轉移到倒置顯微鏡載物臺，鏡下觀察細胞消化情況，當細胞變圓且大量脫落時，準備終止消化（Tip5：若初始的細胞密度比較高，加入胰酶后，肉眼也可觀察到細胞脫落，當細胞有一半左右脫落時，即可終止消化，避免反復將培養(yǎng)皿拿出超凈臺，避免增加污染的風險），用75%的酒精噴灑培養(yǎng)瓶表面，轉移到超凈臺。

6、用移液器加入等量含血清培養(yǎng)基，終止消化。移液器充分且柔和地吹打，避免產(chǎn)生氣泡，使細胞*脫落。

7、將培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中混合液體轉移至離心管中（離心管規(guī)格根據(jù)實驗需要確定），配平后離心3-5分鐘左右（離心機轉速根據(jù)細胞種類而定，常見的有1000-3000rpm/min）。

8、離心好后，用酒精噴壺噴灑離心管表面，轉移進超凈臺，打開蓋子，將上清液倒入廢液缸。

9、加入適量體積含血清培養(yǎng)基，用移液器或巴氏吸管輕輕吹打，制成細胞懸液。

10、將細胞懸液分裝進2個（或多個）潔凈滅菌培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，加入適量培養(yǎng)基，蓋好蓋子。

11、將分裝好的培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡載物臺，觀察細胞情況，細胞應保證一定數(shù)量，數(shù)量太少會影響生長情況。

12、在培養(yǎng)瓶上做標記，注明傳代時間，細胞種類，操作人員等信息。在放入培養(yǎng)箱之前應再次用酒精噴一噴培養(yǎng)瓶表面，然后應記得整理操作臺，用75%酒精擦拭超凈臺臺面，清理廢液和垃圾。

科研實驗中，細胞的體外培養(yǎng)一直是一個重要環(huán)節(jié)。細胞要養(yǎng)好，就要用好血清，如Ausbian®特級胎牛血清，它適合各種細胞培養(yǎng)，尤其適合難養(yǎng)細胞，如：干細胞、肝細胞，神經(jīng)細胞，原代培養(yǎng)、細胞融合、轉染細胞等。