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透析胎牛血清做滅活處理,應(yīng)該怎么處理呢

更新時(shí)間:2021-12-27  |  點(diǎn)擊率:896
  將該病毒的F蛋白(融合蛋白)序列克隆入質(zhì)粒內(nèi),并轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞。轉(zhuǎn)染后第20小時(shí),細(xì)胞先在不含蛋氨酸和半胱氨酸的DMEM+透析胎牛血清中培養(yǎng)了45分鐘(讓細(xì)胞處于饑餓狀態(tài),因培養(yǎng)基中缺少氨基酸),再在同樣上述培養(yǎng)基中培養(yǎng),但添加了35S標(biāo)記的蛋氨酸和半胱氨酸。
  培養(yǎng)4小時(shí)后進(jìn)行分析。即裂解細(xì)胞后,用抗F蛋白的抗體捕獲F蛋白、跑膠并進(jìn)行放射自顯影,分析F蛋白的表達(dá)情況。發(fā)現(xiàn)F蛋白的表達(dá)確實(shí)增加了,但突變后的F蛋白表達(dá)卻無任何變化。結(jié)果證實(shí),野生型的F蛋白確實(shí)參與病毒對宿主細(xì)胞的侵襲。
  值得指出的是,用35S標(biāo)記的蛋氨酸和半胱氨酸用來標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)的蛋白,結(jié)合免疫沉淀用于觀察在某一過程中發(fā)生的某一蛋白的變化,從而發(fā)現(xiàn)該蛋白所扮演的角色,的確是一個普遍有效的方法(在研究信號分子磷酸化的方面,則需要使用32P標(biāo)記的磷酸鹽)。
  透析胎牛血清是否需要做滅活處理?這取決于您的應(yīng)用。
  滅活過程中,會導(dǎo)致血清中某些成分被破壞,如氨基酸,維生素,生長因子等。所以只有在您的實(shí)驗(yàn)對血清有特殊要求時(shí),才會考慮對血清進(jìn)行滅活處理。如您的實(shí)驗(yàn)對血清中的某種組分敏感,需要去除該組分。常見的情況是需要去除血清中的補(bǔ)體蛋白,因?yàn)檠a(bǔ)體在機(jī)體中參與細(xì)胞殺傷,巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞活化,肥大細(xì)胞和血小板組胺釋放,平滑肌收縮等過程,所以一般在免疫學(xué)相關(guān)研究中及肌細(xì)胞和干細(xì)胞的培養(yǎng)過程中需要對血清進(jìn)行滅活處理。
  
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